银耳无菌操作设备又叫接种设备,是用来分离、扩大、转接bifa必发唯一官网,栽培银耳各级菌种的专用设备。常用的有接种箱、接种室、塑料膜接种罩等。我们还将介绍银耳栽培的其他用具及设备。

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1、接种箱

又叫无菌箱,用于银耳菌种分离和菌种扩大、移接,无菌操作,是接种使用的基本设备。根据生产需要,分单人操作式和双人操作式两种。

双人接种箱体积较大,除了接种母种、原种外,还可接种栽培种和生产袋。双人式接种箱的前、后各有1扇约呈70。倾斜、能启闭的玻璃窗,窗下箱体上开有两个圆孔,孔径15—17厘米,两孔中心间距40~50厘米,孔上装有布袖套,袖口有松紧带。如在孔外设置能推移开关的小门效果更好。箱内顶部各安装1支15瓦或30瓦的紫外线灯和1支40瓦的日光灯,一是利用紫外线灯照射杀菌,二是利用日光灯照明。顶外部两端各打1个直径8~10厘米的圆孔,封上口罩式的棉纱布,以利于补充箱内的氧气及箱内的热能散发。接种箱内外各面应刨制光滑并涂上白漆,箱体各接缝处要严格密封。另外,可在箱的底部一侧边缘挖一个边长为10厘拳的正方形口或直径10厘米的圆形口,用一块可推拉的活动木板糍着,以用于清扫箱内垃圾。双人式接种箱的箱体长140~160厘涨,宽80~100厘米,高75~85厘米,箱腿高65~80厘米。

单人接种箱的体积小,适合于母种和原种的接种操作,其结翰与双人式基本相同,通常体积相差一半,仅在一侧设窗、开孔,影隋体长100~120厘米,宽55~65厘米,高50~60厘米,箱腿高65~80厘米。

接种箱的消毒,可用福尔马林+高锰酸钾进行混合熏蒸30~40分钟;最好采用气雾消毒剂消毒。在消毒的同时或消毒之后,鼙用紫外线灯照射30分钟则更好。如只是少量的接种工作,则可在使用前喷1次5%苯酚溶液,并同时用紫外线灯照射20分钟即可。紫外线灯照射期间,人员不要在场,以免对人的眼睛及身体造成伤害。

2、接种室

又叫无菌室或操作室,用于分离、移接母种、原种馘麓培种,一般大规模生产时采用。接种室要求密闭,空气静止;经常消毒,保持无菌状态。它由外面缓冲间和里面接种间组成。缓冲间面积2~3㎡,高2~2.5米,内设洗手处,并备有专用工作服、鞋、帽、口罩、小型喷雾器和常用消毒剂等。接种间不宜过大,否则不易保持灭菌状态;面积在6~10㎡,高2~2.5米,内设接种所需设备和物品。工作台设在接种间中央或靠墙处,要求水平、光滑。通气窗设在室内顶上部,窗孔直径10~15厘米,并用多层棉纱布夹棉花严封。有条件的可安装空气过滤器。接种室要能密闭,室内要平整、光滑,以便擦洗消毒。里、外两间的门应错开方向,不在一条直线上,以免开启时产生空气对流。最好采用铝合金推拉门。有条件的情况下,可同时建两个以上的缓冲间,无菌效果会更好。接种间的门应设在离工作台最远的位置。工作台上方和缓冲间各安装1支30—40瓦紫外线灯和40瓦日光灯,用于灭菌和照明。紫外线灯灯管与台面相距约80厘米,勿超过1米,以加强灭菌效果。使用前要先用紫外线灯照射消毒15—30分钟,或用5%苯酚、3%来苏儿溶液喷雾后再开灯灭菌。空气消毒后经过30分钟,送入准备接种的培养基及所需物品,再开紫外线灯灭菌30分钟。接种时,紫外线灯要关闭,以免伤害工作人员的身体。

接种室灭菌时,为避免对人体造成危害,一般不用甲醛等刺激性药剂,而是用碘伏及紫外线灯等进行灭菌;若用甲醛等刺激性药剂,熏蒸(或喷洒)过后,必须打开门窗基本散净毒气后,再用296—3%来苏儿溶液等刺激性小的药剂喷雾消毒,然后才能进行接种。如果采用接种箱、超净台、火焰或蒸汽接种,接种室就不需另隔缓冲间。

3、塑料膜接种罩

又叫接种帐等,可用塑料薄膜和竹竿或木材制作而成,作为简易接种室。它制作简便,成本低,可移动,能在普通房间等不同场所进行接种操作。对于无接种箱和接种室,而且生产量又较大的生产者,采用此罩进行接种操作,十分方便。

①制作方法:用竹竿或木条制成一个长方体或正方体的框架,宽为2~3米,长为3~4米,高约2米。大小可根据接种量多少决定,但也不宜太大。如接种罩的体积过大,消毒杀菌药物用量较多,还不易创造无菌的环境。框架要求牢固,表面要光滑无尖状物,以防刺破塑料薄膜。框架制好后,在其上罩一个无缝隙的塑料薄膜,四周用沙袋或木板压住塑料薄膜,即成为一个接种罩。将接种罩放在干净的水泥地面上,若地面为土地面,应先在地面上铺上彩条编织布或较厚的干净塑料薄膜,以便于打扫卫生和进行消毒杀菌处理。另外,也可用宽7–8米、长9米的薄膜,在中部适当位置捆扎四个角,悬挂后即成。

②使用方法:将灭菌的料袋冷却后,堆码整齐,放上接种罩。杀菌处理后,再进行接种操作。杀菌方法同常规,既可用高锰酸钾与甲醛混合熏蒸杀菌,也可用气雾消毒剂熏蒸杀菌。气雾消毒剂与甲醛相比,杀菌效果一样,但气雾消毒剂的刺激气味较甲醛小。因此,用甲醛进行杀菌时,要待甲醛气体散去,无太大的刺激气味后,才可进行接种操作。此外,还可采取喷雾来苏儿液或新洁尔灭液进行杀菌处理。无论采用何种杀菌方法,用药后均不宜立即进行接种操作,需过1小时左右,待药物刺激性气味散去后,才能进入进行接种操作。另需注意,在夏:秋高温季节,一定要等料袋完全冷却至室温后,才可进行接种操作。要防止接种罩内温度上升过高,无法进行接种操作。每次接种结束后,搬出菌袋,打扫卫生,再进行下一次接种操作。在大型室内接种培养菌袋的,每次接完种后,只需移开接种罩,菌袋可就地堆码发菌。如接种罩上的塑料薄膜出现裂缝,要及时用不干胶胶布贴住。为了提高效率,可一次制作多个接种罩,同时或轮换使用。

4、蒸汽接种装置

水沸腾时产生的热蒸汽在上升和扩散时,能把含有杂菌孢子的自然空气排开,在蒸汽中心附近形成一片小范围的无菌区。在蒸汽形成的无菌区域内接种的方法就叫蒸汽接种法。

蒸汽接种法需配备接种室和蒸汽发生装置。接种室用一般房间即可。蒸汽发生装置有两种设计方法,一种设在室内,一种设在室外。室内装置由火炉、烧水容器、操作台组成。火炉可用煤球炉或电炉,容器可用中型或大型铝锅代替。锅中放入适量清水,再放上箅子,箅子上放置消过毒的接种工具。操作时,锅盖拿掉,敞开锅,在锅上方蒸汽无菌区内实施接种。室内装置设置简便,但接种量较小,只适于少量菌种移接。室外装置由火炉、容器、送汽管和操作台等组成。火炉、容器设在室外,操作台设在室内,送汽管用于连接容器和操作台。容器可用普通铝锅或家用压力锅,送汽管可用塑料管或橡皮管。在锅盖上开一个和送汽管口径相吻合的圆孔。送汽管的一头插入圆孔中固定密封好,另一头伸进接种室。接种台面板中央开一个直径10–15厘米的圆孔,送汽管的一端就用固定架固定在圆孔中心下方5厘米处。锅内加水燃烧产生的蒸汽通过送汽管由台面圆孔内喷出,即可进行接种操作。室外接种法接种量较大,适宜于大规模生产。

接种前,先将室内打扫干净,然后关闭门窗,减少空气流通,再向空中喷洒清洁水雾,让空气中飘浮的杂菌孢子自然沉落。接种时需要两人配合,一人负责移接菌种,另一人负责被接种的瓶(袋)开口和封口。在接种过程中,所用物品必须置于蒸汽出口上方10~20厘米高度的蒸汽范围内,并要注意防止蒸汽烫伤菌种块或双手。

蒸汽接种法,设备简易,操作方便,无菌程度较高,接种质量可靠。由于菌种得到无菌蒸汽的湿润,比在酒精灯上接种恢复得还快。另外,蒸汽接种法不使用化学药品,还可使接种人员和菌种免受杀菌药物带来的不良影响。但此法接种的成品率比常规的箱内接种稍低,在高温季节也不宜采用。而且在一个接种室内也不能连续长时间操作,以免引起一氧化碳中毒。有鉴于此,最好将室内接种改为在卫生、干净、避风的棚下进行。

5、超净工作台

又称净化工作台或净化操作台,是目前国内外先进的空气净化设备(图4-18)。按操作方式分,则有单人操作、双人对置操作和双人平行操作等几种。

与常见接种设备相比,超净工作台的先进性、可靠性主要表现在洁净度高,接种效果好,正品率高,可连续作业等方面。同时,因洁净空气不断向操作区排出,室内空气不断得到过滤,因此随着操作时间的延长,室内自净效果越来越好。

为提高超净工作台的使用效果,延长其使用寿命,应注意以下事项。

第一,超净台应设置在洁净、明亮的室内,并安装紫外线灯。室内地面采用水磨面或涂刷地板漆,四周墙壁应涂上仿瓷涂料或油漆,保持光滑、无尘;尽力保持室内相对静止;工作服及帽子应选用沾尘量小的布料制作。

第二,室内需保持干燥,空气相对湿度控制在60%以下,梅雨季节应放置生石灰吸潮,以免高效过滤器在潮湿环境中滋生真菌而失效。

第三,配电系统有三相、单相两种。接电时应按正确相极安装,避免风机倒转而失效。如有条件最好安装稳压器,以防电压忽高忽低,烧坏电机或达不到预定的风量、风速,而达不到无菌的效果。

第四,操作台(即出风口)上应尽量少放置与接种无关的器具和物品,以免阻碍出风口的正常气流或产生涡流而带菌。

第五,操作前,先用新沽尔灭或来苏儿等消毒剂拭抹操作台面,切忌向操作区直接喷雾。室内空间可喷雾杀菌。然后接通电源,按下通风键钮,同时开启紫外线灯约30分钟即可开始接种。接种时,把紫外线灯关掉。

第六,接种工具应用常规酒精灯火焰灼烧灭菌,或用几层纸包扎灭菌后使用。

第七,超净台在连续使用的情况下,要每年向厂家邮购同型号的空气过滤器,按照说明书自行更换。将新过滤器粘贴在箱体前面的进风口上,连续使用2~3个月后,应取下用洗洁精或皂液洗净,以黏胶重新贴封,最好再更换新的。

6、臭氧净化嚣

又叫电子灭菌器或电子超净台,是一种新型高效的灭菌装置(图4-19)。它以空气为原料,把空气中的氧气变成具有强氧化作用的臭氧。臭氧是一种广谱杀菌剂,可杀死细菌的繁殖体和芽孢、病毒以及真菌等。空气中少量的臭氧有益于人体健康,但浓度过多会刺激人的呼吸及神经系统,对菌种也不利。因此,臭氧灭菌后要间分解时间才能进行接种。

采用臭氧净化器不需接种箱、接种室,普通房间内就可以放在桌面上操作,在机前接种不受任何条件限制,工效提高3~5倍,接种成功率几乎可达100%,无须任何化学药品。

7、接种工具

指进行银耳菌种的分离、移接时所用的工具。这些工具,除个别的需购买外,大多数还可以自己制作,而且一般自制的更适用。制作材料可选用自行车或三轮车辐条、旧电炉丝、不锈钢电焊条等,以用不锈钢电焊条制作较理想。

(1)接种棒:用于固定自制的接种针、接种环、接种饼等。由金属杆、胶木柄和前端螺母组成。医药仪器商店有售。

(2)接种针:用于挑取细小菌落或孢子等。可取废旧细电炉丝8—10厘米长,拉直、磨光,安装在接种棒上。如无专用接种棒,可用细钢丝将接种针固定在适当粗细的钢丝或自行车钢丝上。

(3)接种环:用于分离转管,或蘸取孢子悬液在斜面、平板上拖制、分离。将接种针的先端用尖嘴钳弯制1个圆圈即成。

(4)接种饼:用于蘸取孢子,抖落于斜面或平板上。将接种针的先端用尖嘴钳缠绕成圆形扁平状即可。

(5)接种刀:用于纵切斜面菌种和挑取茵丝体转管,也可用于组织分离时挑取、移接组织块等。可取长25厘米左右的不锈钢丝或除去外层焊药的不锈钢电焊条,一端烧红捶扁,砂轮打磨成菜刀状,刀口和前端要求薄而锋利,两边均留有刀刃。钢丝后端安装树脂柄或胶木柄。

(6)接种铲:用于挑取子实体组织块,或用于挑铲斜面或平板母种进行母种转扩,或用于母种转接原种。可取长约25厘米的不锈钢丝或除去外层焊药的不锈钢电焊条,将其一端烧红捶扁,砂轮打磨成铲状,前端要薄而锋利。在钢丝后端安装上树脂柄或胶木柄即可。若是用于原种转接栽培种或栽培种接种栽培袋(瓶)的接种铲,则要用直径为6~8毫米的钢筋或不锈钢棒等来制作,其长度约为28厘米。

(7)接种锄:用于横切斜面母种,或直接切断母种斜面移接入原种料瓶内。也可用于刮除菌种表面的老化菌丝、子实体原基等。取长约25厘米的不锈钢丝或除去外层焊药的不锈钢电焊条,将其一端烧红捶扁,砂轮打磨成铲状,前端刀刃要锋利;在火炉上烧红后,将前端弯曲成90。角,使之呈锄状。在钢丝后端安装上树脂柄或胶木柄即可。若是用于原种转接栽培种,或用于栽培种接种栽培袋(瓶)的接种锄,则要用直径为6~8毫米的钢筋或不锈钢棒等来制作,其长度约为28厘米。

(8)接种匙:将长约25厘米的去掉焊药的电焊条的前端烧红,捶打、锉磨成匙状,装上柄即成。用于木屑或颗粒母种扩制原种等。原种扩制栽培种,或栽培种接种栽培料袋(瓶)时,应采用大接种匙。它可用市售不锈钢匙和铝管制作。将不锈钢匙留3~5厘米长的柄,另取直径8毫米、长约25厘米的空心铝管1根,从一端纵锯入3~5厘米长的锯口,再将匙柄稍加修整后,插入锯口内,将铝管捶扁,用2个铆钉固定即成。匙宽以能自由进出银耳瓶口为度,匙的四周要锉锋利。

(9)镊子:长约25厘米、前端带齿的不锈钢长柄镊子,可代替接种铲、接种锄或接种匙,捣碎菌种,及夹取菌种块接入栽培种料袋(瓶)或栽培料袋(瓶)内。不锈钢小镊子也需备几把,用于分离菌种时夹住耳片等。

(10)解剖刀:又叫手术刀,或单面刀片等。由不锈钢刀柄和刀片组成,刀片有几种形状,并可更换。用于菌种分离时切割组织块或削取段木基内菌丝等。

(11)弹簧接种器:又叫接种枪等,是用聚丙烯和金属材料等制成的专用接种工具,有几种不同的样式。常用于栽培种料瓶及栽培料袋(瓶)的打穴(孔)接种等,在银耳生产中使用较普遍。

(12)玻璃刮刀:又叫玻璃推棒。由直径约6毫米的玻璃管烧制而成,用于在平板培养基上拖刮孢子和菌种等。

除以上常见工具外,还有多功能接种机、拌料器、压料器、注水针等接种机械、工具及培养基(料)补充水分或营养的器具等。

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其他用具及设备

在银耳的制种及栽培过程中,除以上介绍的主体设备外,还要配置若干配套或辅助的用具及设备,现择其重要者列举如下。

1、酒精灯

用于接种工具、试管口、瓶口的灼烧灭菌和棉塞的过火灭菌。

玻璃试管

用于制作或保藏母种。常用的有4种规格,均不要翻口的:18毫米(管口直径)×180毫米(管长)及20毫米×200毫米,用于常规制种或菌种保藏;15毫米×150毫米,用于常规制种,有时也用于菌种保藏;10毫米×100毫米,多用于野外采集菌种。以上各类试管,可根据需要选用,备一定数量。

3、三角烧瓶

又叫锥形瓶,用来制备母种培养基和无菌水等。常用规格为100毫升、250毫升、500毫升等。可备一定数量。

培养且

放置子实体、采集孢子或注入培养基,分离培养菌种等用。一般有3种规格:直径15厘米,可在内放置若干载玻片,作孢子发芽用;直径9厘米,常用于分离培养,此种规格用量最多;直径6厘米,多用于野外采种。可据需要选购。

磨口瓶

又叫白料瓶,用于盛装70%~75%消毒用酒精棉球等。可备若干只。

广口瓶

用于盛装酒精等药品,或盛装酒精棉球等。可据需要选用。

7、计量器具

天平(500克)、磅秤(5~500千克)、量筒或量杯(10、25、50、100、500、1000毫升等)、温度计与湿度计。

8、铝锅与电炉

用于母种培养基的配制和加热,以及污浊试管的洗前预煮。铝锅大、中型各需1只,电炉功率为2000~3000瓦。

9、漏斗架

灌制母种培养基的装置,由口径约10厘米的长颈玻璃(或塑料)漏斗、乳胶管、弹簧夹、玻璃管、铁架台和铁环等组成,高度可自行调节。

10、普通棉花、纱布和脱脂棉

普通棉花用作试管塞和菌种瓶塞等;纱布用来过滤母种培养基液等;脱脂棉主要用来制作酒精棉球。

11、菌种瓶

有玻璃瓶和塑料瓶两大类。主要用于制作原种、栽培种。另外,500—750毫升的罐头瓶也可用于瓶栽银耳。

12、栽培袋

聚乙烯袋和聚丙烯袋均可用于制作银耳栽培用料袋,常见规格为12~17厘米(折径宽)×33~55厘米(长)×0.002~0.006厘米(厚)。

恒温培养箱

用于恒温培养菌种。

电热烘箱

用于干燥法测定含水量,以及玻璃器具的干热消毒灭菌等。

16、电冰箱

在高温季节及平时,用于保存银耳菌种。

17、其他用具

烧杯、试管架(框)、玻璃棒、胶布(纸)、牛角勺、水果刀、小铝杯、钟罩、搪瓷盘、塑料盆、pH试纸、记号笔、铅笔、笔记本、标签纸、火柴、生物显微镜、喷雾器、工作服、鞋、帽、口罩、毛巾等。

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